常規(guī)的結(jié)直腸癌篩查方法主要有兩種：糞便隱血檢測（gFOBT/iFOBT）和結(jié)直腸鏡篩查。gFOBT檢測結(jié)果易受飲食、藥物和其他因素影響，檢測穩(wěn)定性不夠，靈敏度范圍從33%到75%，變化幅度大。iFOBT檢測的靈敏度和特異性都優(yōu)于gFOBT檢測，但臨床應(yīng)用中常為定性檢測，且隨著樣本存放時間增加其檢出率大大降低。

而結(jié)直腸鏡檢測為侵入性檢測，易導(dǎo)致腸道出血、穿孔和感染，且嚴(yán)重心臟病、心肺功能紊亂、急性腹瀉、潰瘍性結(jié)腸炎等疾病患者和孕婦都不能進(jìn)行腸鏡檢查。上述兩種結(jié)腸癌篩查人群篩查意愿非常低，中國50歲以上人群腸鏡檢查率低于3%，糞便隱血篩查率也低于5%，我們迫切需要更為方便和精確的篩查方法以提升結(jié)直腸癌篩查率。DNA甲基化檢測就應(yīng)運而生，血漿SEPT9基因甲基化是結(jié)直腸癌早期篩查指標(biāo)，SEPT9甲基化檢測靈敏度和特異性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于FOBT；檢測樣本為血漿，無需復(fù)雜的樣本處理，操作便利，準(zhǔn)確快速，無侵入創(chuàng)傷，是早期結(jié)直腸癌很有前景的篩查方法之一。

下面我們探討一下這個檢測的臨床機(jī)制和檢測特性：

DNA甲基化致癌機(jī)制

DNA甲基化是表觀遺傳調(diào)控的一種，基因啟動子甲基化以后基因表達(dá)就會減弱甚至關(guān)閉，相當(dāng)于基因的開關(guān)。惡性腫瘤中基因的開關(guān)多由DNA甲基化調(diào)控，幾乎所有腫瘤中都會伴隨DNA甲基化的異常改變，且常常高甲基化與低甲基化并存。如腫瘤細(xì)胞中抑癌基因啟動子通常為高甲基化，導(dǎo)致抑癌基因表達(dá)受抑制喪失抑癌功能，從而促進(jìn)癌癥的發(fā)生。而低甲基化通常是整個基因組低甲基化或原癌基因啟動子低甲基化，前者導(dǎo)致染色體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性降低，促進(jìn)癌變發(fā)生，后者則會激活原癌基因，誘導(dǎo)細(xì)胞癌變。

圖片來源：圖蟲創(chuàng)意

SEPT9甲基化與結(jié)直腸癌

SEPT9基因有18個轉(zhuǎn)錄本，涉及肌動蛋白動力學(xué)、血管生成、細(xì)胞遷移、細(xì)胞增殖、細(xì)胞形狀和細(xì)胞分裂等多種細(xì)胞生理學(xué)過程。研究發(fā)現(xiàn)在大腸癌組織中SEPT9_V2的啟動子區(qū)域高甲基化導(dǎo)致該基因表達(dá)缺失，表明該基因在大腸癌發(fā)生過程中為抑癌基因。

SEPT9甲基化在腺瘤和結(jié)直腸癌組織中程度差異較大。結(jié)直腸癌樣本中，從CpG島3（CGI3）的核心到5’末端都存在異常甲基化，而腺瘤中CpG3的5’末端沒有甲基化，這表明從腺瘤發(fā)展為結(jié)直腸癌的過程中，甲基化是慢慢擴(kuò)展的。因此，SEPT9甲基化檢測不僅可以特異性區(qū)分結(jié)直腸癌和腺瘤，篩查出結(jié)直腸癌早期患者，大大提高患者的療效和存活率，同時可以根據(jù)甲基化程度判定結(jié)直腸病變分期，便于臨床醫(yī)生制定治療方案.

SEPT9甲基化篩查結(jié)直腸癌：穩(wěn)定中不乏靈敏及特異性

SEPT9甲基化檢測篩查CRC的靈敏度及特異性如表1所示，SEPT9甲基化檢測的靈敏度和特異性根據(jù)檢測算法的不同也各有不同。研究發(fā)現(xiàn)SEPT9甲基化檢測的特異性可通過增加重復(fù)檢測次數(shù)而提高。Warrant等人對每個樣本進(jìn)行3次重復(fù)測試，若結(jié)果由其中任何一次實驗（1/3算法）決定時靈敏度高達(dá)90%，特異性為88%。但如果其結(jié)果由2次實驗共同（2/3算法）決定時，其特異性能達(dá)到99%，而靈敏度會降低到76%，若同時由3次實驗決定檢測結(jié)果時（3/3算法）特異性甚至能達(dá)到100%。

對于結(jié)直腸癌篩查而言，保證方法學(xué)的高特異性比高靈敏度更加重要。特異性高可確保真陰性率高，排除大量非癌癥患者。因為一旦沒有排除的非癌癥人群進(jìn)入下一步的確診和治療，將給患者帶來嚴(yán)重的心理負(fù)擔(dān)和不必要的過度治療。同時對于疑似案例可通過多次定期隨訪檢測提高SEPT9甲基化檢測的靈敏度。因此結(jié)直腸癌篩查中，建議臨床采用2/3算法甚至3/3算法（特異性100%），確保篩查方法的特異性

SEPT9甲基化陽性率與CRC分期有關(guān)

SEPT9甲基化檢測陽性率隨著結(jié)直腸癌進(jìn)展呈上升趨勢。對結(jié)直腸癌I期檢出率平均約為50%，II期和III期檢出率約為70%，而IV期檢出率幾乎能到100%，同時檢測能保持高達(dá)90%以上的特異性。表2數(shù)據(jù)表明SEPT9甲基化水平與腫瘤惡性程度有關(guān)，SEPT9甲基化檢測是結(jié)直腸癌腫瘤和早期診斷（I期和II期）的有效方法。

研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌早期，如臨床I期和II期，通過外科手術(shù)的治愈率分別為90%和75%。SEPT9甲基化檢測可檢出70%以上的早期結(jié)直腸患者，可大大降低結(jié)直腸癌患者的死亡率。

SEPT9甲基化檢測已經(jīng)證實是早期結(jié)直腸癌篩查很有前景的方法之一，其在臨床應(yīng)用中非常廣泛：

1）可作為有效的結(jié)直腸癌篩查方法；

2）可作為結(jié)直腸癌療效評估和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的隨訪指標(biāo)；

3）可協(xié)助臨床醫(yī)生進(jìn)行結(jié)直腸癌分期和分型；

4）與其他癌癥相關(guān)基因一起作為個性化治療檢測指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)：Li Y, Song L, Gong Y, et al. Detection of colorectal cancer by DNA methylation biomarker SEPT9: past, present and future[J]. Biomarkers in medicine, 2014, 8(5): 755-769.

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